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      單克隆抗體制備過程

      日期:2022-09-03 13:37
      瀏覽次數:32
      摘要:單克隆抗體制備過程

      B淋ba細胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力。B細胞的這種能力和量是有限的,不可能持續分化增殖下去,因此產生免yi 球蛋白的能力也是極其微小的。將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞,再進一步克隆化,這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤細胞的無限分裂的能力,又具有產生特異性抗體的B淋ba細胞的能力。將這種克隆化的雜交瘤細胞進行培養或注入小鼠腹水內即可獲得大量的高效、單一的特異性抗體。這種技術即稱為單克隆抗體技術。單克隆抗體制備過程如下:


      1、免yi 脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多采用純系 Balb/c小鼠。免yi 的方法取決于所用抗原的性質。免yi 方法同一般血清的制備,也可采用脾內直接免yi 法。


      2、骨髓瘤細胞的培養與篩選 在融合前,骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選,防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性(恢復HGPRT的活性的細胞不能在含8-AG的培養基中存活)。骨髓瘤細胞用10%小牛血清的培養液在細胞培養瓶中培養,融合前24h換液一次,使骨髓瘤細胞處于對數生長期。


      3、細胞融合的關鍵:


      1)、技術上的誤差常常導致融合的失敗。例如,供者淋ba細胞沒有查到免yi 應答。這必然要失敗的。


      2)、融合試驗*大的失敗原因是污染,融合成功的關鍵是提供一個干凈的環境,以及適宜的無菌操作技術。


      4、陽性克隆的篩選 應盡早進行。通常在融合后10天作*1次檢測,過早容易出現假陽性。檢測方法應靈敏、準確、而且簡便快速。具體應用的方法應根據抗原的性質,以及所需單克隆抗體的功能進行選擇。常用的方法有 RIA法、 ELISA法和免yi 熒光法等。其中ELISA法*簡便,RIA法*準確。陽性克隆的篩選應進行多次,均陽性時才確定為陽性克隆進行擴增。


      5、克隆化  克隆化的目的是為了獲得單一細胞系的群體??寺』瘧M早進行并反復篩選。這是因為初期的雜交瘤細胞是不穩定的,有丟失染色體的傾向。反復克隆化后可獲得穩定的雜交瘤細胞株。

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